WWW.REFERATCENTRAL.ORG.UA - Я ТУТ НАВЧАЮСЬ

... відкритий, безкоштовний архів рефератів, курсових, дипломних робіт

ГоловнаРізне → Розробка лабораторного регламенту культивування вакцинного штаму ЛК-М вірусу класичної чуми свиней (автореферат) - Реферат

Розробка лабораторного регламенту культивування вакцинного штаму ЛК-М вірусу класичної чуми свиней (автореферат) - Реферат

4. Скибіцький В.Г., Бондар С.В., Білоконь В.І. Пестивірусна інфекція великої рогатої худоби // Науковий вісник НАУ. - №28. – 2000. – С.146 - 150..(здійснене пасажування вірусу діареї ВРХ з визначенням ступеня його інфекційної активності в чутливій клітинній культурі).

5. Шиков О.Т., Ситюк М.П., Білоконь В.І., Панченко О.О.,Собко Ю.А., Ображей А.Ф.Комплексне вивчення протичумної вакцини " ЛК – М "// Ветеринарна біотехнологія.Бюлетень . - №2. – 2002. – С.263 - 268.(безпосередня участь у виробництві вакцини ЛК-М вірусу КЧС та при її дослідженні на імуногенність і нешкідливість ).

6. Шиков О. Т., Ситюк М.П., Білоконь В. І., Панченко О. О., Собко Ю. А., Ображей А. Ф. Испытание иммуногенности производственных серий вирусвакцины "ЛК-М" против классической чумы свиней// Ветеринарна медицина. Міжвідомчий науковий тематичний збірник. – Харків. - 2002. - №80. – С. 641- 645. (безпосередня участь у виробництві вакцини ЛК-М вірусу КЧС, та при її дослідженні на імуногенність і нешкідливість ).

7.Столюк В.В., Мельник М. В., Білоконь В.І., Скибіцький В.Г. Вплив вакцинного штаму ЛК-М вірусу класичної чуми свиней, репродуко-ваного у первиннотрипсинізованій клітинній культурі тестикул ягнят, на імунологічні показники свиней // Науковий вісник НАУ. - №89. – 2005. – С. 73 – 77.(виконання експериментальної частини, пов'язаної з імунізацією тварин, відбором сироваток, аналізом отриманих результатів).

Білоконь В.І. Розробка лабораторного регламенту культивування вакцинного штаму ЛК-М вірусу класичної чуми свиней.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наук за спеціальністю 16.00.03. - ветеринарна мікробіологія та вірусологія. - Національний аграрний університет, Київ, 2006.

Дисертація присвячена розробці методики (технології) культивування вакцинного штаму ЛК-М збудника класичної чуми свиней.

У результаті виконання дисертаційних досліджень були оптимізовані основні елементи отримання первиннотрипсинізованої клітинної культури з тестикул ягнят, розроблено гістохімічний варіант імуноферментного аналізу, призначеного для виявлення та титрування вірусу КЧС у клітинних культурах, отримано перещеплювальну клітин-ну культуру ТЯ та охарактеризовано її основні біологічні властивості, чутливість до вірусів. Експериментально обґрунтовано раціональну методику отримання достатньо концентрованого вірусного матеріалу ( штам ЛК-М вірусу КЧС ), досліджено імуногенні властивості штаму ЛК-М вірусу КЧС, репродукованого у гетерологічній клітинній культурі ТЯ, охарактеризовано вплив його на деякі показники клітинного імунітету у свиней.

Ключові слова: класична чума свиней, штам ЛК-М, вірус КЧС, клітинна культура з тестикул ягнят, гістохімічний варіант імуноферментного аналізу.

Белоконь В.И. Разработка лабораторного регламента культивирования вакцинного штамма ЛК-М вируса классической чумы свиней.

Диссертация на соискание научной степени кандидата ветеринарных наук по специальности 16.00.03. - ветеринарная микробиология и вирусология. - Национальный аграрный университет, Киев, 2006.

Диссертация посвящена разработке методики (технологии) культивирования вакцинного штамма ЛК-М возбудителя классической чумы свиней.

В результате выполнения диссертационных исследований были оптимизированы основные элементы получения первичнотрипсинизиро-ванной клеточной культуры с тестикул ягнят, включая промежуточные процессы такие как подбор донора, методика отбора донорского органа, режим транспортировки в лабораторию, а также получение первичнотрипсинизированной клеточной культуры с тестикул ягнят.

Разработан гистохимический вариант иммуноферментного анализа, предназначенного для выявления и титрования вируса КЧС в клеточных культурах. Метод оказался пригоден и для тестирования вируснейтрализирующих антител к возбудителю классической чумы свиней и занял достойное место в практике диагностических исследований свинопоголовья как на присутствие колостральных и поствакцинальных антител в сыворотках свиней, так и в случае определения вирусоносительства в цитрированной крови.

Получена перевиваемая клеточная культура ТЯ со стабилизированными ростовыми свойствами и охарактеризованы ее основные биологические свойства, чувствительность к вирусам. Экспериментально обосновано рациональную методику получения достаточно концентрированного вирусного материала ( штамм ЛК-М вируса КЧС ), применимого как для накопления вирусного материала при производстве живых и инактивированных вакцин против классической чумы свиней, так и для получения антигена при производстве диагностикумов, используемых для выявления данного заболевания.

В процессе серийных исследований вакцинного штамма ЛК-М, направленных на получение наиболее высокой его инфекционной активности, отрабатывали несколько параметров, которые, по нашему мнению, и согласно литературным данным, могли бы оказывать влияние на накопление изучаемого штамма в культуре клеток ТЯ и SК-6. Определен факт отсутствия существенного влияния отмывки клеточного монослоя перед инфицированием, а также процедуры адсорбции на титр инфекционной активности штамма ЛК-М при культивировании его в уже упомянутых клеточных культурах. В то же время отмечено положительное влияние присутствия минимальной концентрации трипсина в поддерживающей среде клеточной культуры после ее инфицирования вирусом КЧС, штамм ЛК-М.

Установлено положительное влияние присутствия в поддерживающей среде инфицированной клеточной культуры ТЯ и SК-6 сыворотки крови овцы. Замечено, что отрицательное влияние присутствия сыворотки крови овцы в поддерживающей среде после инфицирования возможно только в случае наличия в ней нейтрализирующих антител к пестивирусам. Причем, чем большее количество таких антител в сыворотке крови, тем ниже урожайность вакцинного штамма ЛК-М вируса КЧС, в клеточных культурах ТЯ и SК-6 - вплоть до полной нейтрализации вируса антителами и отсутствия его репродукции в клеточных культурах.

Доказано положительное влияние культивирования инфицированных клеточных культур вирусом КЧС, штамм ЛК-М, в ролерных условиях на конечный показатель инфекционной активности вируса, полученного в таких условиях.

Исследованы иммуногенные свойства штамма ЛК-М вируса КЧС, репродуцированного в гетерологической клеточной культуре ТЯ как в научных экспериментах, так и в ряде производственных испытаний серийных образцов вакцины против КЧС, изготавливаемой на основе штамма ЛК-М, практически замечена безвредность применения упомянутого вакцинного штамма в дозе, в 100 раз превышающей рекомендуемую дозу при иммунизации. Охарактеризовано влияние вакцинного штамма ЛК-М на некоторые показатели клеточного иммунитета у свиней. Изучено, что введение этого штамма приводит к увеличению абсолютного количества лимфоцитов крови и вызывает состояние четко выраженной сенсибилизации лейкоцитов.

Ряд проведенных испытаний производственных серий вакцины, изготовленной из штамма ЛК-М вируса классической чумы, на подсвинках показал, что введение вакцинного штамма ЛК-М вируса классической чумы свиней обеспечивал полную защиту подсвинков от экспериментального заражения их контрольным штаммом "Ши – Мынь" уже на 14-тые сутки после вакцинации. Причем, защиту наблюдали даже у животных, получивших только 0,001 прививочной дозы живого вакцинного штамма ЛК-М. За весь период контрольных испытаний у вакцинированных животных не было замечено повышения температуры тела относительно физиологических норм, а также клинических изменений и поведения. При вскрытии вакцинированных животных, подверженных контрольному заражению после окончания экспериментов, не обнаруживали изменений в патанатомической картине, характерных при заболевании классической чумой свиней.

Анализируя результаты лабораторных исследований, связанных с оптимизацией культивирования штамма ЛК-М вируса КЧС, исследований факторов клеточного иммунитета и клинических испытаний, можно сделать заключение о неплохих показателях инфекционной активности штамма ЛК-М вируса КЧС, сочетаемых с высокими иммуногенными его свойствами при достаточно высоком уровне безвредности.

Ключевые слова: классическая чума свиней, штамм ЛК-М, вирус КЧС, клеточная культура из тестикул ягнят, гистохимический вариант иммуноферментного анализа.

Belokon' V.I. Development of Laboratory Regulation of Cultivation of the Vaccine Strain LK-М as Infection Agent of Classical Swine Fever.

The thesis in candidacy for a degree of the candidate of veterinary sciences on a speciality 16.00.03. - Veterinary microbiology and virology. - National Agrarian University, Kiev, 2006.

The thesis is devoted to the development of the culture method of the vaccine strain LK-М as infection agent of classical swine fever.

Due to the thesis investigations the main techniques of the primary obtained cell culture from lambs' testiculus were optimized and the hystochemical kind of ELISA for the detection and titration of the CSF virus in cell culture was created. The working seed of the cell culture of lambs' testiculus was obtained and its main biological properties and sensibility to virus were described.

There were scientifically grounded the methodology of the virus material obtaining (strain LK-M of CSF virus), being sufficiently concentrated. The immunogenecity of the strain LK-M of CSF virus was researched, being obtained from heterologic cell culture of lambs' testiculus. There were described its influence to some cell immunity parameters in swine.

Key words: classical swine fever, strain LK-M, CSF virus, cell culture from lambs' testiculus, hystochemical kind of ELISA.

Loading...

 
 

Цікаве