WWW.REFERATCENTRAL.ORG.UA - Я ТУТ НАВЧАЮСЬ

... відкритий, безкоштовний архів рефератів, курсових, дипломних робіт

ГоловнаРізне → Участь тромбоксану в загибелі гепатоцитів щурів в культурі (автореферат) - Реферат

Участь тромбоксану в загибелі гепатоцитів щурів в культурі (автореферат) - Реферат

Дослідження впливу ТхВ2 на розвиток апоптотичного процесу інтактих гепатоцитів показали, що цей ейкозаноїд підсилював апоптоз на початкових стадіях – конденсації хроматину в ядрі. Застосований на тлі дії хенодезоксихолевої кислоти, яка сама являється індуктором апоптозу, ТхВ2 сприяв завершенню апоптозу. За умов дії сильного ушкоджуючого агента – чотирихлористого вуглеця, в гепатоцитах починалися процеси апоптозу, які здебільшого закінчувалися постапоптотичним некрозом. В цих умовах ТхВ2 також посилював початкові апоптотичні перетворення, однак не призводив до посилення кінцевих стадій апоптозу. Блокатор циклооксигенази –ацетилсаліцилова кислота і блокатор тромбоксансинтази – бензілімідазол пригнічували апоптоз гепатоцитів в умовах дії чотирихлористого вуглецю і не мали впливу на апоптоз, індукований хенодезоксихолевою кислотою. Блокатор утворення мітохондріальних пор циклоспорин А пригнічував апоптоз, індукований ТхВ2. Ці дані, а також підвищення активності каспази 3 при дії ТхВ2 довели, що в механізм дії ТхВ2 задіяний мітохондріальний шлях. Загалом результати дослідження свідчать про те, що продукт циклооксигеназного шляху метаболізму арахідонової кислоти ТхВ2 відіграє регуляторну роль в підтримці клітинного гомеостазу в печінці за рахунок впливу на апоптоз за нормальних умов і впливає на нього при ушкодженні різної етіології.

Ключові слова: гепатоцити, тромбоксан, апоптоз, некроз, аутофагія, чотирихлористий вуглець, хенодезоксихолева кислота.

АННОТАЦИЯ

Грушка Н.Г. Участие тромбоксана в гибели гепатоцитов крыс в культуре.-Рукопись.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.00.13 - физиология человека и животных. - Институт физиологии им. О.О.Богомольца НАН Украины, Киев, 2007г.

Диссертация посвящена изучению участия метаболита арахидоновой кислоты по циклооксигеназному пути – ТхВ2 в регуляции жизнедеятельности и гибели гепатоцитов крыс в культуре в норме и при воздействии гепатотропных

веществ – четыреххлористого углерода (ССl4) и хенодезоксихолевой кислоты (ХДХК).

Известно, что тромбоксан (Тх) образуется тромбоцитами и другими клетками, в том числе гепатоцитами и клетками Купфера и существенно влияет на их жизнедеятельность. Он принимает участие в регуляции функций печени при физиологических условиях и играет значительную патогенетичну роль при ее повреждении. Влияние ТхВ2 на клеточную гибель (апоптоз, некроз, аутофагическую гибель), их морфологические проявления и механизмы практически не исследованы.

Адекватной экспериментальной моделью для изучения непосредст-венного действия экзогенных эйкозаноидов, в том числе ТхВ2 на апоптотическую и некротическую гибель клеток является первичная культура гепатоцитов, поскольку она позволяет исследовать их прямой эффект на гепатоциты, не опосредованый нейтрофилами, сосудистими реакциями и другими процессами, происходящими на органном и организменном уровнях. Гибель гепатоцитов крыс в первичной культуре мы изучали методами прижизненной окраски ядерными красителями Хехст 33342 и пропидиум йодид, электронной микроскопии, а также определения активности каспазы 3 и 8 колориметрическим методом.

Установленно, что экзогенный ТхВ2 через 4, 8 и 24 час в концентрациях 1, 0,1, 0,01, 0,001 мкмол/л увеличивает количество гепатоцитов на ранних ста-диях апоптоза (с конденсацией ядерного хроматина) и не влияет на некроз и интенсивность аутофагии. Не выявлено достоверных изменений количества клеток с морфологическими признаками, которые характеризуют поздние стадии апоптоза (фрагментированные ядра и распад на апоптотические тельца).

Обработка гепатоцитов ССl4 вызывала как некротическую, так и апоптотическую гибель гепатоцитов. ТхВ2 на фоне действия ССl4 усиливал апоптотическую гибель на начальных стадиях (конденсации хроматина). В отличие от ССl4, обработка гепатоцитов ХДХК вызывала уменьшение количества живых гепатоцитов преимущественно за счёт апоптотической гибели. При действии ТхВ2 на гепатоциты, поврежденные ХДХК, которая сама является индуктором апоптоза, значительно увеличивалось количество клеток с конечной стадией апоптоза - фрагментацией ядер и клеток.

Ингибитор циклооксигеназы – ацетилсалициловая кислота оказывала апоптоз-ингибирующее действие на гепатоциты, поврежденные ССl4, существенно не влияя на количество живых и некротических клеток. Ингибирование тромбоксансинтетазы бензилимидазолом оказывало также угнетающее действие на апоптоз, вызванный ССl4. Эти ингибиторы не влияли на апоптоз, вызванный ХДХК.

Обработка гепатоцитов культивированных в присутствии ТхВ2 (0,1 мкмоль/л), блокатором митохондриальных пор циклоспорином А в концентрации 1 мкмоль/л существенно уменьшала количество апоптотических клеток через 4, 8 и 24 час, что свидетельствует об участии митохондрий в модуляции апоптоза при действии ТхВ2. В наших исследованиях достоверных изменений количества некротических гепотоцитов при действии циклоспорина А выявлено не было. При введении циклоспорина А происходило уменьшение количества гепатоцитов на стадии конденсации хроматина.

Нами установленно, что ТхВ2 через 4 час приводит к повышению активности эфекторной каспзы 3, без существенных изменений каспазы 8.

Полученные данные свидетельсвуют, что ТхВ2 играет регуляторную роль в поддержании клеточного гомеостаза в печени. Он стимулирует более физиологический способ удаления поврежденных и старых клеток – апоптоз, существенно не влияя на некроз и аутофагию. Показано также, что в условиях повреждающего воздействия на гепатоциты ХДХК ТхВ2 излишне стимулирует апоптоз, приводя к снижению количества живых клеток и, следовательно может быть патогенетическим фактором при патологии печени.

Ключевые слова: гепатоциты, тромбоксан, апоптоз, некроз, аутофагия, четыреххлористий углерод, хенодезоксихолевая кислота.

SUMMARY

Grushka N.G. Involvement of thromboxane in the cell death of cultured rat hepatocytes. -Manuscript.

Dissertation for candidate of sciences degree by speciality 03.00.13 – physiology of animals and humans.- Bogomoletz Institute of Physiology, National Academy of Sciences of Ukraine, Kiev, 2007.

The subject of this investigation was to clarify the role of cyclooxygenase metabolites of arachidonic acid TxB2, PGE2 and PGF2a in a regulation of the viability and cell death in cultured rat hepatocytes under normal and pathological conditions. It was established, that TxB2 increased the amount of hepatocytes with morphological features of apoptosis both in intact cultures and in cultures injured with carbon tetrachloride (CCl4) or chenodeoxycholic acid (CDCA). TxB2 did not affect necrosis and the intensity of autophagy. PGE2 and PGF2a exerted less pronounced effects on apoptotic cell death in cultured hepatocytes. It was established, that exogenous ТхB2 increased the amount of hepatocytes with morphological features of early stages of apoptosis (nuclear chromatin condensation) in intact cultures and caused activation of caspase 3. ТхВ2 treatment of hepatocytes injured by chenodeoxycholic acid (apoptosis inducer) significantly increased the amount of cells with a final stage of apoptosis. ССl4 caused the apoptotic processes in the hepatocytes and the increase in the secondary (postapoptotic) necrosis. TxB2 intencified the action of carbon tetrachloride on hepatocyte apoptotic death and increased early stages of apoptosis - chromatin condensation. Cyclooxygenase inhibitor acetylsalicylic acid and thromboxane synthase inhibitor benzylimidazole decreased hepatocytes apoptosis, induced by ССl4, and did not change apoptosis, induced by CDCA. Treatment of cultured hepatocytes with ТхВ2 and inhibitor of mitochondrial permeability transition pores cyclosporine A, essentially decreased the amount of apoptotic cells. This indicates on participation of mitochondria in modulation of apoptosis by ТхВ2. These findings suggest that TxB2 influences on hepatocytes apoptosis under normal and pathological conditions and it plays a regulatory role in maintaining of cell homeostasis in the liver.

Key words: hepatocyte, thromboxane, apoptosis, necrosis, autophagy, carbon tetrachloride, chenodeoxycholic acid.

Loading...

 
 

Цікаве